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小鼠端粒長度檢測試劑盒.
更新時間：2026-09-08
訪問量：3165
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
生產(chǎn)地址：上海
| 品牌 | Biowing | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
小鼠端粒長度檢測試劑盒使用說明書(定量PCR法)
【產(chǎn)品規(guī)格】
1. TLM50 50 * 2 * 3 Reaction
【產(chǎn)品說明】
端粒（Telomeres）：是真核生物線性染色體末端的非編碼串聯(lián)重復(fù)性(TTAGGG)n陣列，端粒長度的變化，與衰老、癌癥、或神經(jīng)退行性等多種疾病相關(guān)。定量PCR法是檢測端粒長度的經(jīng)典技術(shù)，用時短，操作簡單，結(jié)果準確，適用于批量樣本檢測。
本產(chǎn)品試劑盒采用熒光 qPCR（SYBRgreen）檢測端粒長度，檢測對象為血液、組織DNA或細胞DNA 。該試劑盒具有以下特點。
1. 穩(wěn)定：全程閉管操作，無交叉污染。
2. 方便：操作簡單，無需電泳步驟。
3. 相對定量：引入一個端粒長度檢測的標準品，用于構(gòu)建標曲得到擬合方程，可獲得樣品的相對長度（T/S）。
【運輸及保存條件】
低溫冷凍運輸， -20℃保存，有效期 6個月，凍融以后，4℃保存，有效期2周。
【產(chǎn)品組分】
組分名稱 | TLM50 | 儲存條件 |
Biowing®Telomere Detection Mix | 780 ul×4管 | -20 ℃,避光 |
Primer（端粒） | 570µL×2管 | -20 ℃ |
Primer（內(nèi)參） | 570µL×2管 | -20 ℃ |
Standard 1 | 50µL | -20 ℃ |
RNase Free Water | 100µL | -20 ℃ |
Paraffin oli | 1ml | 4 ℃ |
注：本試劑盒提供試劑，使用前請上下輕柔顛倒十次混勻，后低速離心、小心開啟。避免起泡。實驗時，操作須全程在冰上進行 。Biowing®Telomere Detection Mix 啟用后避免反復(fù)凍融，使用結(jié)束后置于4℃保存，兩周內(nèi)使用完畢。Standard 1是C57幼鼠鼠尾DNA，濃度為40ng/μ L，用于構(gòu)建標準曲線，端
粒具體算法見附錄2。
【操作步驟】
1. 樣品準備及質(zhì)控
端粒長度檢測與樣本質(zhì)量相關(guān)性較大，DNA 質(zhì)量要求較高，如果對一批樣本進行檢測，若利用不同提
取方式或者不同提取試劑盒提取的 DNA，以及質(zhì)量較差的 DNA，我們建議對樣本 DNA 進行純化，保證樣本的均一化。純化的方式本方案采用磁珠分選的方法，具體步驟見附錄 1。若采用其他純化方式如乙醇法純化、過柱純化，可自行嘗試；純化后的 A260/280 及 A260/230 的比值基本相同，在 1.3-2.0 之間。
將樣本濃度標化至10ng/µL，上樣2µL 。標準品的DNA濃度標化至20ng/µL ，按2倍、4倍、8倍濃度梯度稀釋后，上樣2µL ，用于構(gòu)建標準曲線（其中端粒通道DNA上樣量40ng 、20ng 、10ng 、5ng；內(nèi)參通道
DNA上樣量為40ng 、20ng 、10ng）。
2. qPCR反應(yīng)液的準備
(1) 根據(jù)所要檢測樣品的數(shù)量，計算所需反應(yīng)孔數(shù)，每個樣本兩個基因，分別做3個重復(fù)孔。端粒反應(yīng)孔數(shù)=（Standard1 ×4 個梯度）× 3 +（ 樣本數(shù)）× 3
內(nèi)參反應(yīng)孔數(shù)=（Standard1 × 3 個梯度）× 3 +（ 樣本數(shù)）× 3
(2) 根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計算所需的 Mix 總量（含有 1孔的加樣損失量）： Mix（端粒或內(nèi)參） =（反應(yīng)孔數(shù)+1）× 18μl
(3) 各試劑放 2-8℃條件下融化，并根據(jù)下表所示準備 qPCR Mix：
端粒通道
組分/樣品管 | 1人份 | N人份 |
Biowing®Telomere Detection Mix | 10.4 | 10.4 N |
Primer（端粒） | 7.6 | 7.6N |
內(nèi)參通道
組分/樣品管 | 1人份 | N人份 |
Biowing®Telomere Detection Mix | 10.4 | 10.4 N |
Primer（內(nèi)參） | 7.6 | 7.6N |
3. 加樣
（1）震蕩混勻 qPCR Mix，低速離心，將管蓋殘留液體收集至管底。
（2）向每孔反應(yīng)管中分裝 18μL qPCR Mix。
（3）向已分裝過 qPCR Mix 的反應(yīng)管中加入10ul石蠟油。
（4）向反應(yīng)管中加入樣品后短暫離心，加樣示例如下：
PCR模板 | qPCR Mix | 總體積 |
樣本（模板上樣量20ng） 2 μL | 18 μL | 20 μL |
Standard 1（模板上樣量40ng）2 μL | 18 μL | 20 μL |
Standard 1（模板上樣量20ng）2 μL | 18 μL | 20 μL |
Standard 1（模板上樣量10ng）2 μL | 18 μL | 20 μL |
Standard 1（模板上樣量5ng）2 μL | 18 μL | 20 μL |
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