-
雙色熒光TaqMan探針法：為什么比SYBR Green法更可靠？
發布時間： 2026-09-07 點擊次數： 25次在qPCR檢測中，常用的檢測方法有兩種：SYBR Green法和TaqMan探針法。翼和生物的端粒酶催化亞基TERT基因表達檢測試劑盒采用的是雙色熒光TaqMan探針法，這其中有什么講究？為什么說TaqMan探針法比SYBR Green法更可靠？
SYBR Green法：經濟但特異性不足SYBR Green是一種能與雙鏈DNA結合的熒光染料。當它與雙鏈DNA結合時，熒光強度會顯著增強。在qPCR反應中，隨著擴增產物的增加，SYBR Green結合的雙鏈DNA越來越多，熒光信號也越來越強。
SYBR Green法的優點是成本低、使用方便，不需要設計特異性探針。但它的缺點也很明顯：特異性不足。因為SYBR Green能與所有雙鏈DNA結合，包括非特異性擴增產物和引物二聚體，所以容易產生假陽性信號，結果的準確性和重復性都不夠理想。
在檢測低豐度基因（如TERT）時，SYBR Green法的這個缺點尤為突出，因為非特異性擴增的干擾會更加明顯。
TaqMan探針法：特異且靈敏TaqMan探針法使用的是特異性的熒光探針。探針是一段與靶序列互補的寡核苷酸，兩端分別標記熒光報告基團和淬滅基團。當探針完整時，報告基團發出的熒光被淬滅基團吸收，檢測不到熒光。在PCR擴增過程中，Taq酶的5→3外切酶活性會將探針切斷，報告基團和淬滅基團分離，從而發出熒光。
TaqMan探針法的優勢非常明顯：
• 特異性高：探針只能與特異性靶序列結合，只有靶序列被擴增時才會產生熒光信號，大大減少了非特異性擴增的干擾。
• 靈敏度高：探針法的背景熒光低，能檢測到更微量的靶序列。
• 重復性好：結果穩定，CV值低。
• 可多重檢測：通過不同熒光標記的探針，可以在單管中同時檢測多個靶基因。
翼和生物的雙色熒光技術翼和生物的端粒酶檢測試劑盒采用雙色熒光TaqMan探針法，FAM通道檢測TERT基因，Cy5通道檢測內參基因GAPDH。單管反應即可同時檢測目的基因和內參基因，既節省了樣本和試劑，又保證了兩個基因檢測條件的一致性，使定量結果更準確。
此外，翼和生物還創新性地采用了兩套檢測系統信號增強技術。針對TERT基因設計了兩對定量引物和同一種熒光標記的探針，混合后進行多重定量，顯著提高了整個體系的靈敏度和TERT熒光信號量，ΔRn增強了3倍。這對于檢測低豐度的TERT基因來說尤為重要。
相比市場上其他采用SYBR Green法的同類產品（如江蘇凱基的試劑盒），翼和生物的TaqMan探針法在結果的準確性、穩定性和靈敏度上都更好，是科研工作者的可靠選擇。
銷售熱線
主營產品：主要技術服務：細胞STR鑒定；支原體檢測；細胞種屬檢測；端粒長度檢測；端粒酶活性檢測等。
產品分類
